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上海通蔚生物科技有限公司

elisa檢驗(yàn)中陽性對(duì)照品和陰性對(duì)照品

時(shí)間:2015-5-7閱讀:545
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    陽性對(duì)照品(positive control)和陰性對(duì)照品(negative control)是檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)有效性的控制品,同時(shí)也作為判斷結(jié)果的對(duì)照,因此對(duì)照品,特別是陰性對(duì)照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測(cè)標(biāo)本的組成相一致。

    以人血清為標(biāo)本的測(cè)定,對(duì)照品也為人血清,因?yàn)檎H搜逶诟鞣Nelisa模式中可產(chǎn)生不同程度的本底。由于大量正常人血清較難得到,國(guó)外elisa試劑盒中的對(duì)照品多以復(fù)鈣人血漿(recalcified human plasma)為原料,即在血漿中加入鈣離子,使其中的纖維蛋白質(zhì)凝固,除去凝塊后所得的液體,其組成與血清相似。

    陰性對(duì)照品須現(xiàn)行檢測(cè),確定其中不含待測(cè)物質(zhì)。例如檢測(cè)HBsAg的陰性對(duì)照品中不可含HBsAg,抗HBs也是陰性。陽性對(duì)照品多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì),其中加入一定量的待檢物質(zhì),此量在Elisa試劑盒說明書中標(biāo)明。加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱,在測(cè)定中得到的吸光值與受檢的標(biāo)本吸光值比較,可對(duì)標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一個(gè)粗略的估值。檢測(cè)HBsAg的elisa試劑盒檢測(cè)敏感度約為0.5ng/ml,陽性對(duì)照品中HBsAg含量約為10ng/ml。在對(duì)照品中一般加入抗生素和防腐劑,以利保存。

   定量測(cè)定的elisa試劑盒應(yīng)含有制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用的參考標(biāo)準(zhǔn)品,應(yīng)包括覆蓋可檢測(cè)范圍的4-5個(gè)濃度,一般均配入含蛋白保護(hù)劑及防腐劑的緩沖液中。

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