1. 抗原的制備：
標準菌株的選擇：所用的菌種傷寒桿菌H901和傷寒桿菌O901應具有典型形狀菌落及生化反應。在生理鹽水中不發生自身凝集，與特異血清有高度凝集者可作為菌種。
2. 血清菌液的制備
1) 原液制備：
1.H菌液的制備：將合格的傷寒桿菌H菌株接種于一般瓊脂的克氏瓶或大試管內 37℃孵育18—24小時。肉眼查詢有無雜菌生長，必要時作鏡檢。用無菌甲醛生理鹽水洗下菌苔，將洗下液體裝入無菌試管內，置37℃恒溫箱18—24小時以滅菌。得到原液。用作無菌實驗行將菌液接種于肉湯及瓊脂培養基培養4天，無活菌生長者才可運用。
2.O菌液的制備：將合格的傷寒桿菌H菌株依上法培養后，用無菌0.5%石灰酸鹽水將菌苔洗下，洗液裝入無菌試管置于37℃溫箱中18—24小時滅菌得原液。經查看無菌時可以運用(如無傷寒桿菌O菌株也可用H菌株制備O抗原。即用0.5%石灰酸生理鹽水洗下H菌菌液置100℃水浴60分鐘，破壞其H抗原即為O菌液。
2) 運用液的制備：
合格的原液用標準比濁管核算含菌落數目后，用生理鹽水稀釋至每毫升含菌10億。是為了運用液參加適量甲醛使其為0.25%，制備好的原液及運用液均保存在2—10℃冰箱中備用，有效期為1年。
3．血清免疫方法
1) 選擇體重2—3千克的健康雄兔2—3只，由耳靜脈采血1毫升，別離血清。與進行免疫用的細菌做凝集實驗，測定有無天然凝集素。如無或微量時，該動物可用于免疫。
2) 將已稀釋的抗原按以下劑量及程序注入兔耳靜脈。
日期第1天第5天第10天第15天第20天
打針劑量0.5ml、1ml1、5ml、2ml、2.5ml
3) 末次打針后7天耳靜脈采血1毫升，別離血清。用上述菌液作試管凝集實驗，滴定抗菌血清中抗體的效價，效價在1：2000以上可放血。若效價不高可再增量打針菌液1—2次，再行試血。試血合格可頸動脈放血(方法見附錄)。別離血清，參加防腐劑(如萬分之一的硫化汞)放4℃保存備用。