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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA試劑盒實驗操作注意事項如下

時間:2018-1-9閱讀:349
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檢測成果牢靠的必要條件。如不留意,就易呈現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內(nèi)質控孔成果正常,而標本孔的OD值卻顯著偏高)是各個廠家洗板機調(diào)試中常常遇到的問題。以期給我們帶來一些啟發(fā),以改進洗板機的裝置調(diào)試水平,進步臨床檢測質量。也有廠家堅持試劑盒高的流行病學敏感度,科學地對待反響成果。

 

基因工程抗原較組成肽抗原有*的*性,就HCV-ELISA 試劑盒來講,ELISA試劑盒靠前代產(chǎn)品為組成肽抗原,主要是HCV特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產(chǎn)品包被的抗原既有基因工程抗原又有組成肽,僅僅其時的基因工程抗原不全,僅包含了HCV 的核心區(qū)片段;第三代產(chǎn)品基本上采用了基因工程抗原,并且這些抗原包含更多、更安穩(wěn)、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代試劑的敏感度大大進步了。

 

基因工程抗原與組成肽抗原的差異如下:
a,要留意防止呈現(xiàn)嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因而,在以HRP為符號酶的ELISA試劑盒測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。
b,冰凍保存的血清標本須留意防止因停電等造成的重復凍融。ELISA試劑盒標本的重復凍融所發(fā)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果,然后引起假陰性成果。此外,凍融標本的混勻亦應留意,不要進行劇烈振動,重復倒置混勻即可。
c,樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染,一則細菌的成長,其所排泄的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分解效果;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會對用相應酶作符號的測定辦法發(fā)生非特異性干擾。
d,血清標本如是以無菌操作別離,則能夠在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長期保存,應在-70℃以下。

 

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