ELISA試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的聯絡只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例，參與板孔中的標本，其間的抗原并不是都有對等的和固相抗聯絡的時機，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。
在一定時間內，陰性孔可堅持無色，而陽性孔則隨時間的延伸而呈色加強。恰當前進溫度有助于加速顯色進行。
在定量測定中，參與底物后的反應溫度和時間應按規矩力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間通常不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯況恰當縮短或延伸反應時間，及時區分。
這是一個逐，因而需經渙散才干抵達反應的結尾。在這以后參與的酶符號抗體與固相抗原的聯絡也相同如此。這便是為何ELISA查看試劑盒反應老是需要一定時間的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃（冰箱溫度）等。
ELISA試劑盒測定技能的展開首要在于方法學的展開，而方法學的展開依托于試劑生產技能不斷前進更新和型符號物的運用。
37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體聯絡的適合溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研討時，實驗標明，兩次抗原抗體反應通常在37℃經1-2小時，商品的生成可達。
可前進反應的溫度，有些實驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中，以構成zui多的沉積。但因所需時間太長，在ELISA查看試劑盒中通常不予選用。
反應的溫度和時間仍是影響顯色的要素。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應查詢效果。
但為保證實驗效果的穩定性，宜在規矩的恰當時間閱讀效果。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達，隨即逐漸削弱，至2小時后即可*闌珊至無色。TMB的中止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應中止。這類中止劑尚能使藍色堅持較長時間(12-24小時)不褪，是目視區分的出色中止劑。此外，各類酸性中止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
ELISA試劑盒分子生物學正在并終究肯定會讓對悉數生命科學有一個悉數而*的知道，其對免疫測定技能展開的影響也是直接而又有效的，對曾經一些難以查看的生物活性物質的測定，并且大大前進了查看的靈敏度和特異性。