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中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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明膠酶譜法實(shí)驗(yàn)中:凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)染色操作步驟以及說(shuō)明

時(shí)間:2015/8/3閱讀:4805
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常規(guī)考馬斯亮藍(lán)SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)染色是實(shí)驗(yàn)室常用的凝膠染色方法。銀染方法雖然靈敏度
高,但所需試劑復(fù)雜并且有毒有害,操作步驟繁瑣,難以控制獲得好的染色效果。

染色步驟:
1. 此染色液即為工作液,使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝
膠,并緩慢搖動(dòng)2h;
2. 傾去染色液,用脫色液沖洗凝膠;
3. 以脫色液覆蓋凝膠,緩慢搖動(dòng)2h,傾去脫色液,再加入新脫色液進(jìn)行脫色,直至獲得清晰的
藍(lán)色的條帶和干凈的背景(通常此過(guò)程需要2~4h,也可脫色過(guò)夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈
的背景);
4. 對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相,凝膠可放置在7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置(P2000)對(duì)
凝膠進(jìn)行處理后保存。
安全性:含有甲醇,無(wú)特殊毒性,按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理。
說(shuō)明:
1. 染色液配方:0.25g 考馬斯亮藍(lán)R250+420ml 甲醇+100ml 冰乙酸,定容至1000ml,混合1h 后用
Whatman 1 號(hào)濾紙過(guò)濾,于室溫可無(wú)限期保存;
2. 脫色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(V:V:V);
3. 保存液:7%冰醋酸;
4. 凝膠染色之后,染色液可以回收利用,裝入新容器內(nèi),室溫或4 oC 保存,可反復(fù)使用2-4 次。

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