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流式細胞術在免疫研究中的多功能特點

閱讀:137發布時間:2016-8-3

流式細胞術在免疫研究中的多功能特點

 

     單激光光源   儀器安裝一個激光器,一般以氬離子型為主有效光譜為488nm和515nm,適用激發異硫氰酸熒光素(FITC);亦可激發異硫氰酸四甲基洛他明(Tetramethylrho-damine isothiocynate,TROTC)但效果不甚理想。合適的光源應是氪離子激光,它的激發光譜531nm和856nm,也適用于Rhodamine 類衍生物XRITC。細胞用一種熒光染料標記的抗體染色,稱為單標記染色;亦可用雙標記染色,即用兩種不同發射波長的熒光染料分別標記兩種抗體,同時針對一群細胞表面的兩種抗原進行測定。三標記染色是3種染料標記3種抗體同時對細胞著染,即FITC和藻紅蛋白(Phyco-erithrin,PE)標記抗體同Fluorescent tandem結合物公用(R-phycoerythrin,加Texas red做為一種Duo CHROME)。近年新發展一種非熒光標記法:免疫膠體金標記,它可以補充熒光染料因光譜互相重疊而使檢測范圍受限的不足。方法是利用膠體金顆粒直接標記抗體,細胞染色后用623nm波長激發,90℃散射光提供信號。金標記的細胞活性不受影響,可分選并用于增殖性實驗。

    雙激光光源   應用雙激光光源的儀器擴大了其分辨的標記信號范圍和種類。根據光的波長有兩種配合方式:一是紫外光和可見光波長配合,兩個激光器分別發射可見光及紫外光其zui大特點是同時做細胞DNA含量和細胞表面標記的測定,研究活細胞周期活動中的免疫現象。同時,還可用Hoechat 33342在一定濃度下穿透細胞膜速率不同的特點,區別不同細胞類型,鑒別不同分化階段的細胞等。另一種是染料激光光源配合,是在較大功率的激光束中加一熒光染料器,使它發出特殊染料需要的激發光波長,以增加測定范圍,近年由于染料的發展,已很少用此技術。

    熒光偏振技術   是在儀器上裝備特殊的偏振光濾片,發出的偏振激光對大分子及細胞結構和構象的改變異常敏感。它可測定伴隨細胞轉化產生的早期免疫及生化改變。如膜的流動性、細胞骨架成分、DNA構象的變化等,可以提供敏感的早期有價值的信息。

    分選(Sorting)和自動克隆技術  目前通用的流式細胞計zui大的優點是可以對細胞群體進行分選和細胞克隆化。其原理是在樣品噴射成液流、一系列液滴形成的過程中,這些液滴帶上電荷,細胞被包在一個帶電的液滴內。在強大的電場作用下,從主流束中偏向一側,通過帶電的水滴及電場控制,把偏離的液滴收集于試管內、玻片上或定量收集于96孔培養板上,后者即為自動克隆化技術。這一切都可根據研究人員的需要,在儀器的顯示屏上確定要分選的細胞群體。每次可分選兩群細胞,隨著技術的進步,分選量也越來越大。


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