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猴子神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測試劑盒

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更新時間:2018-01-28 00:06:01瀏覽次數:241次

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猴子神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測試劑盒

人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒操作步驟

    1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時后,4℃冰箱放置16~18小時。

    2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復三次,zui后將反應板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡。

   3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時。

   4. 洗滌同2。

   5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升。同時作稀釋液對照。37℃放置2小時。

   6. 洗滌同2。

   7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時。

   8. 洗滌同2。

   9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘。

   10. 加終止液:每孔50微升。

   11. 觀察結果:用酶聯免疫檢測儀記錄490nm讀數。

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ELISA中,常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和堿性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP)。在少數商品ELISA試劑中,應用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。

國產ELISA試劑一般都用HRP制備結合物。HRP是一種糖蛋白,含糖量約為18%,分子量為44000,是一種復合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結合而成,是一種卟啉蛋白質。主酶無色糖蛋白在275nm波長處有zui高吸收峰,輔基是深棕色的含鐵卟啉環,在403nm波長處有zui高吸收峰。HRP的純度用RZ(Reinheit Zahl,德文,意為純度數)表示,是403nm的吸光度與280nm吸光度之比,高純度的HRPRZ?.0

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