大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒
大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒操作步驟
1. 包被抗原：用包被液將抗原作適當(dāng)稀釋, 一般為1～10微克/孔，每孔加200微升，37℃溫育1小時(shí)后，4℃冰箱放置16～18小時(shí)。
2. 洗滌：倒盡板孔中液體，加滿洗滌液，靜放三分鐘，反復(fù)三次，zui后將反應(yīng)板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡。
3. 加封閉液200微升，37℃放置一小時(shí)。
4. 洗滌同2。
5. 加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,，每孔200微升。同時(shí)作稀釋液對(duì)照。37℃放置2小時(shí)。
6. 洗滌同2。
7. 加辣根過(guò)氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時(shí)。
8. 洗滌同2。
9. 加底物：鄰苯二胺溶液加200ml，室溫暗處10--15分鐘。
10. 加終止液：每孔50微升。
11. 觀察結(jié)果：用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀記錄490nm讀數(shù)。
大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒
HRP除符合上述的ELISA中標(biāo)記酶的要求外，更有價(jià)格低廉和性質(zhì)較穩(wěn)定的特點(diǎn)。值得注意的是，在選用酶制劑時(shí)，除其純度RZ外，更應(yīng)注意酶的活力。高純度的酶如保存不當(dāng)，活力也會(huì)降低。酶制劑的活力以所含的酶活力單位表示，可用對(duì)底物作用后生成產(chǎn)物量的測(cè)定進(jìn)行試驗(yàn)。
國(guó)外很多ELISA試劑采用堿性磷酸酶（AP）作為標(biāo)記酶。常用的AP有兩個(gè)來(lái)源，分別從大腸桿菌和小牛腸膜中提取。不同來(lái)源的酶生化特性特性略不相同，從大腸桿菌中提取的AP分子量為80000，酶作用的pH為8.0；用小牛腸膜中提取的AP分子量為100000，zui適pH為9.6。在ELISA中，AP系統(tǒng)的敏感度一般高于HRP系統(tǒng)，空白值也較低，但AP價(jià)格昂貴，制備結(jié)合物所得率也較HRP低。
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