大鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒

實驗材料與試劑配制：

1.儀器與材料：酶標儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。

三．樣品收集、處理及保存

1）.細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2）細胞：用PBS反復(fù)洗滌細胞3次，調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3）血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

4）血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

5）體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6.）組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。

樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

7）保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

大鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒

酶標儀校正程序
◎濾光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標儀上卸下，用UV-2201型紫外-可見分光光度計（波長精度±0.3nm）于可見光區(qū)對每個濾光片進行掃描，其檢測值與標定值之差為濾光片波長精度。
◎通噵差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標板小孔杯（杯底須光滑，透明，無污染以酶標板架作載體， 將其（內(nèi)含200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A左右）置于8個通道的相應(yīng)位置，蒸溜水調(diào)零，1于490nm處連續(xù)測三次,觀察其不同通道的檢測器測量結(jié)果的*性，可用極差值來表示。孔間差的測量是選擇同一廠家，同一批號酶標2板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.100A左右）先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。
n 零點飄移（穩(wěn)定性觀察）：取8只小孔杯分別置于8個通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸溜水并調(diào)零，于490nm處每隔30分鐘測一次，觀察各個通道4小時內(nèi)吸光度的變化。

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