沙門氏菌套裝生化鑒定管7種(SN1070)
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含碳化合物的利用
細菌能否利用某些含碳化合物作為*碳源,反映該菌是否產生代謝這種化合物的有關酶系,因而作為鑒定依據。測定的基礎培養基配方很多,因種而異?,F介紹1種合成的基礎培養基,有些細菌還可適當補加各種維生素。培養基可制成液體,分裝試管,也可制成固體平板??捎糜跍y定的底物種類很多,有單糖、雙糖、糖醇、脂肪酸、羥基酸及其他有機酸、醇、各種氨基酸類胺類以及碳氫化合物等。糖的含量一般為1%,醇類酚類等的含量一般為0.1-0.2%,氨基酸的含量一般為0.5%。因碳氫化合物不溶于水,可在液體培養基中振蕩培養,或加入到45℃的固體培養基中,振蕩后立即倒成平板。有些底物不宜用高壓滅菌,可用過濾法滅菌后加入已滅菌的基礎培養基中,某些醇類和酚類不必滅菌。
接種和觀察結果:菌種做成懸液,避免帶入少量碳源干擾試驗結果。平板培養用接種環點種,液體培養則用直針接種。每一測定菌必須接種未加碳水化合物的空白基礎培養基作對照。
適溫培養2、5、7天后觀察,凡測定菌在有碳水化合物的培養基中生長情況,明顯超過空白培養基的生長量為陽性,否則為陰性。假若兩種培養基上生長情況差別不明顯,開在同一培養基上連續移種3次,如差別仍不明顯則以陰性論。
7、葡萄糖的氧化發酵試驗
在細菌鑒定中,糖類發酵產酸是1項重要依據。細菌對糖類的利用有2種類型:1種是從糖類發酵產酸,不需要以分子氧作為zui終受氫體,稱發酵型產酸;另一種則以分子氧作為zui終受氫體,稱氧化型產酸。前者包括的菌種類型為多數。氧化型產酸量較少,所產生的酸常常被培養基中的蛋白胨分解時所產生的胺所中和,而不表現產酸。為此,Hugh和Leifson提出一種含有低有機氮的培養基,用以鑒定細菌從糖類產酸是屬氧化型產酸或發酵型產酸。這一試驗廣泛用于細菌鑒定。一般用葡萄糖作為糖類代表。也可利用這一基礎培養基來測定細菌從其他糖類或醇類產酸的能力。
(1)接種 :以18-24h的幼齡菌種,穿刺接種在上述培養基中,每株菌接4管,其中2管用油封蓋(凡士林:液體石蠟=1:1混合后滅菌),約加0.5-1厘米厚,以隔絕空氣為閉管。另2管不封油為開管,同時還要有不接種的閉管作對照。適溫培養1、2、4、7天觀察結果。
(2)結果觀察:氧化型產酸――僅開管產酸,氧化作用弱的菌株往往先在上部產堿(1-2d),后來才稍變酸。發酵型產酸則開管及閉管均產酸,如產氣,則在瓊脂柱內產生氣泡。
8、糖或醇類發酵試驗
不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異,或能利用或不能利用,能利用者,或產氣或不產氣??捎弥甘緞┘鞍l酵管檢驗。
試驗方法:以無菌操作,用接種針或環移取純培養物少許,接種于發酵液體培養基管,若為半固體培養基,則用接種針作穿刺接種。接種后,置36±1.0°C培養,每天觀察結果,檢視培養基顏色有無改變(產酸),小倒管中有無氣泡,微小氣泡亦為產氣陽性,若為半固體培養基,則檢視沿穿刺線和管壁及管底有無微小氣泡,有時還可看出接種菌有無動力,若有動力、培養物可呈彌散生長。
本試驗主要是檢查細菌對各種糖、醇和糖苷等的發酵能力,從而進行各種細菌的鑒別,因而每次試驗,常需同時接種多管。一般常用的指示劑為酚紅、溴甲酚紫,溴百里藍和An-drade指示劑。
注:對于糖醇類發酵現在一般用糖、醇類細菌微量生化鑒定管在36℃18-24h即可出結果。
9、硝酸鹽(Nitrate)還原試驗
有些細菌具有還原硝酸鹽的能力,可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮氣等。亞硝酸鹽的存在可用硝酸試劑檢驗。
試驗方法:臨試前將試劑的A(磺胺酸冰醋酸溶液)和B(α-萘胺乙醇溶液)試液各0.2ml等量混合、取混合試劑約0.1ml、加于液體培養物或瓊脂斜面培養物表面,立即或于10min內呈現紅色即為試驗陽性,若無紅色出現則為陰性。
用α-萘胺進行試驗時,陽性紅色消退很快、故加入后應立即判定結果。進行試驗時必須有未接種的培養基管作為陰性對照。α-萘胺具有致癌性、故使用時應加注意。
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