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試驗方法：
１）O’Meara氏法：將試驗菌接種于通用培養基，于36±1°C培養48h，培養液1ml加O’Meara試劑（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氫氧化鈉水溶液）1ml，搖動試管1~2min，靜置于室溫或36±1°C恒溫箱，若4h內不呈現伊紅、即判定為陰性。亦有主張在48~50°C水浴放置2h后判定結果者。
２）Barritt氏法：將試驗菌接種于通用培養基，于36±1°C培養4天、培養液2.5m*加入5°Cα萘酚（2-na-phthol）純酒精溶液0.6ml,再加40%氫氧化鉀水溶液0.2ml，搖動2~5min，陽性菌常立即呈現紅色，若無紅色出現，靜置于室溫或36±1°C恒溫箱，如2h內仍不顯現紅色、可判定為陰性。
３）快速法：將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中、挑取產酸反應的三糖鐵瓊脂斜面培養物一接種環，乳化接種于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動后放置5min，判定結果。不產酸的培養物不能使用。
本試驗一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽胞桿菌和葡萄球菌等其它細菌時，通用培養基中的磷酸鹽可阻礙乙酰甲基醇的產生，故應省去或以氯化鈉代替。
6、含碳化合物的利用
細菌能否利用某些含碳化合物作為*碳源，反映該菌是否產生代謝這種化合物的有關酶系，因而作為鑒定依據。測定的基礎培養基配方很多，因種而異。現介紹1種合成的基礎培養基，有些細菌還可適當補加各種維生素。培養基可制成液體，分裝試管，也可制成固體平板。可用于測定的底物種類很多，有單糖、雙糖、糖醇、脂肪酸、羥基酸及其他有機酸、醇、各種氨基酸類胺類以及碳氫化合物等。糖的含量一般為1％，醇類酚類等的含量一般為0.1－0.2％，氨基酸的含量一般為0.5％。因碳氫化合物不溶于水，可在液體培養基中振蕩培養，或加入到45℃的固體培養基中，振蕩后立即倒成平板。有些底物不宜用高壓滅菌，可用過濾法滅菌后加入已滅菌的基礎培養基中，某些醇類和酚類不必滅菌。
接種和觀察結果：菌種做成懸液，避免帶入少量碳源干擾試驗結果。平板培養用接種環點種，液體培養則用直針接種。每一測定菌必須接種未加碳水化合物的空白基礎培養基作對照。
適溫培養2、5、7天后觀察，凡測定菌在有碳水化合物的培養基中生長情況，明顯超過空白培養基的生長量為陽性，否則為陰性。假若兩種培養基上生長情況差別不明顯，開在同一培養基上連續移種3次，如差別仍不明顯則以陰性論。
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