魚 羥 脯 氨 酸(Hyp) 酶 聯 免 疫 分 析
試 劑 盒 使 用 說 明 書
本試劑盒僅供研究使用。
檢 測 范 圍 ： 96T
0.2μg/L -9μg/L
使 用 目 的 ：
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關液體樣本中羥*(Hyp)含量。
實 驗 原 理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魚羥*(Hyp)水平。用純化的魚羥*
(Hyp)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入羥*(Hyp)，再與
HRP 標記的羥*(Hyp)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加
底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色， 并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的羥*(Hyp)呈正相關。 用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度 （OD
值） ，通過標準曲線計算樣品中魚羥*(Hyp)濃度。
試 劑 盒 組 成
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  標準品（16μg/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8 條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張
6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標 本 要 求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操 作 步 驟
1.  標準品的稀釋： 本試劑盒提供原倍標準品一支， 用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
8μg/L  5 號標準品  150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
4μg/L  4 號標準品  150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2μg/L  3 號標準品  150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
1μg/L  2 號標準品  150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
0.5μg/L  1 號標準品  150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔、
待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同 3。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。
操 作 程 序 總 結 ：
計 算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的 OD 值代入方程式， 計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。
注 意 事 項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔*孔的 OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保 存 條 件 及 有 效 期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6 個月