豬藍耳病抗體（PRRS-Ab）檢測試劑盒價格測定錯誤結果的原因分析

ELISA即酶聯免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。Engvall 和Perlmann于1971年zui先應用該法進行了IgG定量測定，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。豬藍耳病抗體（PRRS-Ab）檢測試劑盒價格的基本原理是：

①使抗原（或抗體）結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯結成酶標抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開，zui后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變為有色產物，根據其顏色反應的深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。

酶聯免疫（ELISA）使用試劑盒檢測過程中值得關注的問題

1、儀器質控

 為使儀器保持*工作狀態，應建立維護和校正儀器的標準操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍）、溫箱、洗板機和酶標儀。

◎移液器：加樣量小（20-200μl），其準確性直接影響實驗結果，利用稱重法檢查：低、中、高三個刻度分別吸取指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確，一般應在±5%以內；

◎恒溫箱： 經常檢查恒溫箱溫度計所示的溫度和水中（或溫箱內）實測溫度是否*，允許有±1℃的誤差；

◎洗板機： 每個廠家設置洗板后的殘留液有各自的規定，一般不超過2μl；人工扣板時，墊紙不濕；定期檢查管孔是否堵塞；

◎酶標儀：經常維護其光學部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。

2、試劑盒選擇

◎應盡量選擇正規廠家，產品經相應政府部門審核認可，試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價。

◎靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力；2）為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。

◎特異性：常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應，使測定結果升高，可能導致假陽性，所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。

◎精密度：一般指其批內CV%，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍。

◎準確度：通過添加回收實驗進行評價。

◎簡便性：指在不影響試劑的前三項指標的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結果判斷簡單明了，定量試驗結果計算也應簡單。

◎安全性：指試劑對操作者和環境安全無害無傳染性。

◎經濟性：試劑在同等質量條件下通過大規模生產或技術進步降低成本，而市場價格比較合理。

◎試劑評價：需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。

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