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更新時(shí)間:2018-03-26 08:21:45瀏覽次數(shù):208次
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大鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
一、預(yù)試驗(yàn)(一)抗體包被的酶標(biāo)板的制備
1. 以碳酸鹽緩沖液將抗體稀釋成適當(dāng)濃度(參考:5ug/ml),加入酶標(biāo)板(50ul/孔),以膠帶封口,于4℃過液。
2. 棄抗體液,以雙蒸水沖洗3次,自然干燥后以膠帶封口。此為由已知抗體包被的酶標(biāo)板,備用。
(二)底物濃度的摸索在底物緩沖液中加入不同量的底物(參考:5mg/10ml),加入酶標(biāo)板中(50ul/孔),以膠帶封口,37℃避光保存2h,在沒有明顯變色的條件下選擇盡可能大的底物濃度。
(三)酶標(biāo)抗原濃度的摸索選擇明確為陰性的標(biāo)本,加至已包被抗體的酶標(biāo)板中(50ul/ 孔);用稀釋液稀釋酶標(biāo)抗原至適當(dāng)倍數(shù)(參考:40~4000倍),同時(shí)加入酶標(biāo)板中(50ul/ 孔),混合后封口后于37℃作用30min。大鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒以洗液連續(xù)沖洗5次,然后于吸水紙上拍干,加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min,在保持有明顯變色的條件下選擇盡可能小的酶標(biāo)抗原濃度。
二、正式試驗(yàn)
1. 以稀釋液將待檢標(biāo)本做適當(dāng)稀釋(預(yù)試中確定)加入包被有已知抗原的酶標(biāo)板中(50ul/孔),加封口膠帶于37℃作用30min。
2. 棄反應(yīng)液,以沖洗液連續(xù)洗板5次并于吸水紙上拍干。
3. 加入酶標(biāo)抗體(濃度在預(yù)試中確定)。加封口膠帶后于37℃作用30min。
4. 重復(fù)第2步。
5. 加底物(濃度在預(yù)試中確定),加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min,其間不時(shí)觀察,顯色滿意后加終止液50ul/孔。
6. 于酶標(biāo)儀測定OD值,OPD用492nm測定,TMB用450nm測定。窗體頂端
大鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒結(jié)果演示
大鼠膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒結(jié)果判斷定性測定
定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義。
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