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上海滬震生物科技有限公司
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黃曲霉*

時間:2014/10/9閱讀:859
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黃曲霉操作前打開紫外燈30-60分鐘,這個大家都知道。不過你別忘了還要在操作前至少10分鐘打開抽濾裝置來保證效果,但紫外消毒期間建議不要進去一次特意打開抽濾裝置,可以與紫外燈一起打開,黃曲霉此時不需要抽濾開的過大就可以。(所謂的抽濾裝置就是就是那個風機,就是吹風超凈工作臺,不是過濾培養液的)!

細胞傳代培養(消化法)具體操作:

一:傳代前準備;

1.預熱培養用液:把已經配制好的裝有培養液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。

2.75%酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.正確擺放使用的器械:保證足夠的*作空間,不僅便于*作而且可減少污染。

4.點燃酒精燈:注意火焰不能太小。

5.準備好將要使用的消毒后的空培養瓶,放入微波爐內高火,8分鐘再次消毒。

6.取出預熱好的培養用液:黃曲霉取出已經預熱好的培養用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內。

7.從培養箱內取出細胞:注意取出細胞時要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,再在鏡下觀察細胞。

8.打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時要在酒精燈上燒口消毒。

二:胰蛋白酶消化;

1.加入消化液:小心吸出舊培養液,用PBS清洗(沖洗),加入適量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以蓋住細胞,*消化溫度是37℃。

2. 黃曲霉 顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察消化細胞,若胞質回縮,細胞之間不再連接成片,表明此時細胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養液:棄去胰蛋白酶液,注意更換吸管,加入新鮮的培養液。

三:吹打分散細胞;

1.吹打制懸:用滴管將已經消化細胞吹打成細胞懸液。

2.吸細胞懸液入離心管:將細胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心:平衡后將離心管放入臺式離心機中,以1000/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液,加入新培養液:棄去上清液,加入2ml培養液,用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液。

四:分裝稀釋細胞;

1.分裝:將細胞懸液吸出分裝至2-3個培養瓶中,加入適量培養基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察細胞量,必要是計數。注意密度過小會影響傳代細胞的生長,傳代細胞的密度應該不低于5×105/ml。zui后要做好標記。

五:繼續培養;

用酒精棉球擦拭培養瓶,適當旋松瓶蓋,放入CO2培養箱中繼續培養。黃曲霉傳代細胞2小時后開始貼附在瓶壁上。當生長細胞鋪展面積占培養瓶底面積25%時為一個+,占50%為++,占75%時為+++。  

XY1396    黃色短桿菌

XY1397    黃曲霉

XY1398    黃綠青霉

XY1399    黃綠綠僵菌

XY1400    黃桿菌屬

XY1401    環狀芽孢桿菌

XY1402    化學轉化小鼠鼻咽上皮細胞,TMNE細胞

XY1403    化膿性鏈球菌

XY1404    厚孢根霉

XY1405    猴腎細胞系 VERO E6細胞

XY1406    猴腎細胞系 MA-104細胞

XY1407    猴腎細胞系 BSC-1細胞

XY1408    猴腎細胞,Marc145細胞

XY1409    猴腎C M145細胞

XY1410    猴胚胎腎上皮細胞,marc-145-EGFP-puro細胞

XY1411    猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞,RF/6A細胞

XY1412    猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞, RF/6A細胞

XY1413    猴的骨髓間充質干細胞,MSCS細胞

XY1414    喉表皮樣癌細胞,HEp-2細胞

XY1415    紅曲霉

XY1416    紅平紅球菌

XY1417    紅白細胞白血病細胞,HEL299細胞

XY1418    橫紋肌瘤細胞,A-673細胞

XY1419    恒河猴腎細胞,MA-104細胞

XY1420    恒河猴腎細胞,LLC-MK2細胞

XY1421    恒河猴腎細胞,LLC-MK2細胞

XY1422    恒河猴胚腎細胞,FRhK-4細胞

XY1423    恒河猴胚腎細胞,FRhK-4細胞

XY1424    黑色素瘤細胞,B16細胞

XY1425    黑曲霉

XY1426    褐鼠胰島素瘤上皮細胞,RIN-m細胞,

XY1427    褐球固氮菌

XY1428    和元菌種與細胞

XY1429    漢遜德巴利酵母

XY1430    海棗曲霉

XY1431    哈茨木霉

XY1432    果子貍腎上皮細胞,Hed68細胞

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