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黃曲霉操作前打開紫外燈30-60分鐘,這個大家都知道。不過你別忘了還要在操作前至少10分鐘打開抽濾裝置來保證效果,但紫外消毒期間建議不要進去一次特意打開抽濾裝置,可以與紫外燈一起打開,黃曲霉此時不需要抽濾開的過大就可以。(所謂的抽濾裝置就是就是那個風機,就是吹風超凈工作臺,不是過濾培養液的)!
細胞傳代培養(消化法)具體操作:
一:傳代前準備;
1.預熱培養用液:把已經配制好的裝有培養液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。
2.用75%酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。
3.正確擺放使用的器械:保證足夠的*作空間,不僅便于*作而且可減少污染。
4.點燃酒精燈:注意火焰不能太小。
5.準備好將要使用的消毒后的空培養瓶,放入微波爐內高火,8分鐘再次消毒。
6.取出預熱好的培養用液:黃曲霉取出已經預熱好的培養用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內。
7.從培養箱內取出細胞:注意取出細胞時要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,再在鏡下觀察細胞。
8.打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時要在酒精燈上燒口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出舊培養液,用PBS清洗(沖洗),加入適量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以蓋住細胞,*消化溫度是37℃。
2. 黃曲霉 顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察消化細胞,若胞質回縮,細胞之間不再連接成片,表明此時細胞消化適度。
3.吸棄消化液加入培養液:棄去胰蛋白酶液,注意更換吸管,加入新鮮的培養液。
三:吹打分散細胞;
1.吹打制懸:用滴管將已經消化細胞吹打成細胞懸液。
2.吸細胞懸液入離心管:將細胞懸液吸入10ml離心管中。
3.平衡離心:平衡后將離心管放入臺式離心機中,以1000轉/分鐘離心6-8分鐘。
4.棄上清液,加入新培養液:棄去上清液,加入2ml培養液,用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液。
四:分裝稀釋細胞;
1.分裝:將細胞懸液吸出分裝至2-3個培養瓶中,加入適量培養基旋緊瓶蓋。
2.顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察細胞量,必要是計數。注意密度過小會影響傳代細胞的生長,傳代細胞的密度應該不低于5×105/ml。zui后要做好標記。
五:繼續培養;
用酒精棉球擦拭培養瓶,適當旋松瓶蓋,放入CO2培養箱中繼續培養。黃曲霉傳代細胞2小時后開始貼附在瓶壁上。當生長細胞鋪展面積占培養瓶底面積25%時為一個+,占50%為++,占75%時為+++。
XY1396 黃色短桿菌
XY1397 黃曲霉
XY1398 黃綠青霉
XY1399 黃綠綠僵菌
XY1400 黃桿菌屬
XY1401 環狀芽孢桿菌
XY1402 化學轉化小鼠鼻咽上皮細胞,TMNE細胞
XY1403 化膿性鏈球菌
XY1404 厚孢根霉
XY1405 猴腎細胞系 VERO E6細胞
XY1406 猴腎細胞系 MA-104細胞
XY1407 猴腎細胞系 BSC-1細胞
XY1408 猴腎細胞,Marc145細胞
XY1409 猴腎C M145細胞
XY1410 猴胚胎腎上皮細胞,marc-145-EGFP-puro細胞
XY1411 猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞,RF/6A細胞
XY1412 猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞, RF/6A細胞
XY1413 猴的骨髓間充質干細胞,MSCS細胞
XY1414 喉表皮樣癌細胞,HEp-2細胞
XY1415 紅曲霉
XY1416 紅平紅球菌
XY1417 紅白細胞白血病細胞,HEL299細胞
XY1418 橫紋肌瘤細胞,A-673細胞
XY1419 恒河猴腎細胞,MA-104細胞
XY1420 恒河猴腎細胞,LLC-MK2細胞
XY1421 恒河猴腎細胞,LLC-MK2細胞
XY1422 恒河猴胚腎細胞,FRhK-4細胞
XY1423 恒河猴胚腎細胞,FRhK-4細胞
XY1424 黑色素瘤細胞,B16細胞
XY1425 黑曲霉
XY1426 褐鼠胰島素瘤上皮細胞,RIN-m細胞,
XY1427 褐球固氮菌
XY1428 和元菌種與細胞
XY1429 漢遜德巴利酵母
XY1430 海棗曲霉
XY1431 哈茨木霉
XY1432 果子貍腎上皮細胞,Hed68細胞
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