（一）實驗目的：學習細菌的莢膜染色法：

（二）實驗原理：由于莢膜與染料間的親和力弱，不易著色，通常采用負染色法染莢膜，即設法使菌體和背景著色而莢膜不著色，從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時一般不加熱固定，以免莢膜皺縮變形。

（三）實驗器材

1. 活材料：培養3-5天的膠質芽胞桿菌（Bacillus mucilaginosus,俗稱“鉀細菌”）。該菌在*作碳源的培養基上生長時，莢膜豐厚。

2. 染色液和試劑 :Tyler法染色液：（見附二、（一）、14）、用濾紙過濾后的繪圖墨水、復紅染色液（見附二、（一）、2）、黑素（見附二、（一）、7）、6%葡萄糖水溶液、1%甲基紫水溶液、甲醇、20%CuSO4水溶液、香柏油、二甲苯。

3. 器材： 載玻片、玻片擱架， 擦鏡紙、顯微鏡等。

（四）實驗方法

推薦以下四種染色法，其中以濕墨水方法較簡便，并且適用于各種有莢膜的細菌。如用相差顯微鏡檢查則效果更佳。

1. 負染色法：

（1）制片：取潔凈的載玻片一塊，加蒸餾水一滴，取少量菌體放入水滴中混勻并涂布。

（2）干燥：將涂片放在空氣中晾干或用電吹風冷風吹干。

（3）染色：在涂面上加復紅染色液染色2-3min.

（4）水洗：用水洗去復紅染液。

（5）干燥：將染色片放空氣中晾干或用電吹風冷風吹干。

（6）涂黑素：在染色涂面左邊加一小滴黑素，用一邊緣光滑的載玻片輕輕接觸黑素，使黑素沿玻片邊緣散開，然后向右一拖，使黑素在染色涂面上成為一薄層，并迅速風干。

（7）鏡檢：先低倍鏡，再高倍鏡觀察。

結果：背影灰色，菌體紅色，莢膜無色透明。
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