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半貼壁細胞的傳代技術

閱讀:6155發布時間:2017-9-25

貼壁細胞(adherent cells)這類細胞的生長必須有可以貼附的支持物表面,細胞依靠自身分泌的或培養基中提供的貼附因子才能在該表面上生長,繁殖。當細胞在該表面生長后,一般形成兩種形態,即成纖維樣細胞性或上皮樣細胞。

貼壁細胞傳代時通常采用以下方法:

1.選用細胞生長狀態好(90-95%),生長數量大于5×105 的細胞進行傳代。

2.用移液槍充分吹打培養皿壁,使半貼壁細胞脫落下來(如果細胞貼壁比較牢,可使用*進行消化1-3min,1~2滴血清終止消化)。

(注:消化液配比為:0.25%*+0.02%EDTA。若貼壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后,即可用手指輕輕拍打細胞,培養瓶側部或底部使大部分貼壁細胞脫落,之后立即加入細胞終止液,終止細胞消化。每種細胞的消化時間有差異,消化時注意觀察,不要消化太久。)

3.將混勻后懸液吸至15ml離心管中,1000rpm*3min離心,去原培養基。

4.棄離心管中上清液,加入細胞培養液重懸細胞。細胞計數調整至5×105/ml。

5.細胞分瓶后,加入適量細胞培養液至細胞培養瓶中,置于5%CO2、95%空氣、37oC培養箱靜置培養24小時。


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