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elisa檢測方案

閱讀：319發(fā)布時間：2014-12-29

磷酸化抗體提純證明這個抗體只能與其相對應(yīng)的磷酸化蛋白反應(yīng)。
雙抗體夾心法：
1）將該磷酸化抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2）加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
3）加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。
4）加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行該抗原的定性或定量。
應(yīng)該設(shè)立兩組，即一組固相抗體加磷酸化抗原，然后另一組固相抗體加非磷酸化抗原。然后顯色后對比兩組的OD差異。
加磷酸化抗體的組的OD當(dāng)然高了。
酶標(biāo)抗體是抗你的磷酸化蛋白的抗體啊，這個是要你自制的。底物你用zui普通的就行了，比如OPD、TMB等都行。
建議:酶標(biāo)抗體用磷酸化抗體，而固化抗體不用磷酸化抗體，尤其是你的磷酸化蛋白只有1個磷酸化位點的時候。因為固相抗體和酶標(biāo)抗體有可能去競爭結(jié)合磷酸化位點。

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