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技術(shù)文章

ELISA為什么所有孔都*沒顏色

閱讀：1687發(fā)布時(shí)間：2014-12-15

 

ELISA自己包被抗體—封閉—加樣—二抗—HRP—TMB顯色，上述步驟應(yīng)該是對的，為什么所有孔都*沒顏色.

做了6次了，怎么知道是哪一步出問題了，全是陰性？你的試驗(yàn)想檢測什么？檢測抗原？檢測抗體？你這個(gè)實(shí)驗(yàn)思路問題很大。
    你自己先固定抗體，加樣，是不是加抗原？再加二抗，請問，加不加這個(gè)樣，也就是加不加這個(gè)抗原，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎？酶標(biāo)二抗是和抗體結(jié)合的。還有你的二抗和一抗之間中間隔了個(gè)抗原，二抗還能和抗體結(jié)合嗎？

是想檢測抗原的，固定的一抗可以和抗原反應(yīng)，同時(shí)也能和酶標(biāo)二抗反應(yīng)，不存在有東西隔在中間的情況。這個(gè)實(shí)驗(yàn)思路是標(biāo)準(zhǔn)的啊，教科書上都是這么做的。

你這個(gè)實(shí)驗(yàn)是不是，出現(xiàn)陰性結(jié)果，就是樣品是陽性？
我解釋一下，你實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)的問題： 固定一抗，直接加酶標(biāo)二抗，二抗結(jié)合上去，酶也結(jié)合上去，沖洗，去掉未結(jié)合的酶標(biāo)二抗，加顯色劑，陽性。 固定一抗，加抗原反應(yīng)。加酶標(biāo)二抗，如果抗原不影響酶標(biāo)二抗和抗體結(jié)合的話，酶標(biāo)二抗和一抗結(jié)合，沖洗未結(jié)合的二抗，加顯色劑，陽性。
    那么，請問，加不加抗原，結(jié)果有什么不同？只有你的方法的結(jié)果是陰性的，才有說服力，不過靠陰性反應(yīng)來確定抗原是不是存在，有點(diǎn)不靠譜。

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