人Kim-1 免疫組化說(shuō)明書(shū),試劑盒

該試劑盒以HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性Kim-1 抗原。該試劑盒具有
靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的Kim-1 一抗與相應(yīng)靶
抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，zui后加入HRP-SA，形成抗原—
特異一抗—*化二抗—HRP-SA 復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。

人Kim-1 免疫組化說(shuō)明書(shū),試劑盒

試劑盒所含試劑：
試劑A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（選用）
試劑B 封閉緩沖液（封閉用） 20 mL
試劑C （*分裝）已稀釋的即用型Kim-1 一抗（2.5ml）
試劑D （*分裝）*化羊抗兔IgG 1 支
（濃度1.5 mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液20ml
試劑E HRP-SA 復(fù)合物1 支（濃度1 μM，稀釋比1:50~1:200）100 μL
試劑F DAB 顯色液 5ml

人Kim-1 免疫組化說(shuō)明書(shū),試劑盒

實(shí)驗(yàn)步驟（建議方案）：
石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min；
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無(wú)水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%
乙醇2 min；75%乙醇2min，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫
度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見(jiàn)附1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，
直接進(jìn)入第5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過(guò)夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育
30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），
37℃濕盒中孵育30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應(yīng)用DAB 溶液（試劑F）顯色；
15.復(fù)染：自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；