魚總三碘甲狀腺原氨酸含量測定(TT3)Elisa試劑盒說明書

應用雙抗體夾心法測定標本中魚總三碘甲狀腺原氨酸(TT3)水平。用純化的魚總
三碘甲狀腺原氨酸(TT3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入總
三碘甲狀腺原氨酸(TT3)抗原，再與HRP 標記的總三碘甲狀腺原氨酸(TT3)抗體結合，形成
抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下
轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總三碘甲狀腺原氨
酸(TT3)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品
中魚總三碘甲狀腺原氨酸(TT3)濃度。

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5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備
用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔，在*、第二孔中分別加標
準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為18pmol/L，12pmol/L ，6pmol/L，3pmol/L，1.5pmol/L）。

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