小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒基因工程試劑對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響
免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。
小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒HBsAg試劑特點(diǎn)(檢測(cè)模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位,可測(cè)得HBsAg變異樣品,提高檢測(cè)的特異性(99.98%)提高檢測(cè)的靈敏度,應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml
方法一 雙抗體夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。
T/G HA-VSMC(人主動(dòng)脈血管平滑肌) CD30分子(CD30) 平滑肌肌球蛋白(SMM)
對(duì)于定量檢測(cè)來說,主要還是一個(gè)準(zhǔn)確度的驗(yàn)證。不過我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說的要好,所以就貼上去了。相對(duì)回收率可能會(huì)高于*的,如果只是說“損失程度”,其實(shí)是不準(zhǔn)確的。應(yīng)該說,回收率越接近*,說明這個(gè)試劑盒的準(zhǔn)確度越高。
人肺泡上皮 角蛋白19(CK-19) 脂氧素A4(LXA4)
人支氣管上皮 角蛋白18(CK-18) 蛋白酶3特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)
人氣管上皮 嗜鉻蛋白A(CgA) β-促脂素(β-LPH)
人小氣道上皮 視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(pRB) 脂磷壁酸(LTA)
人肺成纖維 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA) 乙胺碘呋酮(AD)
人支氣管平滑肌 成熟促進(jìn)因子(MPF) 唾液酸(SA)
人氣管平滑肌 去唾液酸糖蛋白受體(AGSPR) 鞘磷脂(SM)
可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR) 尿游離*(UFC)
Elisa的發(fā)展