供應(yīng)SYBR Green I,*SYBR Green I

概念
　　lSYBR Green I是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長的染料。在游離狀態(tài)下，SYBR Green I發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強。因此，SYBR Green I的熒光信號強度與雙鏈DNA的數(shù)量相關(guān)，可以根據(jù)熒光信號檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。SYBR Green I 的zui大吸收波長約為497nm，發(fā)射波長zui大約為520nm。 　　l
SYBR Green I核酸染料（電泳用）
　　SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡單：無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 與dsDNA 結(jié)合熒光信號會增強800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號強，背景信號低。可適用于多種電泳分析。 　　SYBR Green I 適合于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠，聚丙烯酰胺凝膠電泳，脈沖電場凝膠電泳，和毛細管電泳等。 　　SYBR Green I 與雙鏈DNA的親和力非常高，因此可以用做電泳前染色，對分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq 酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。另外，SYBR Green I 與EB相比，誘變能力大大降低。 　　SYBR Green I 核酸凝膠染液（SYBR Green Ndcleic Acid Gel Stains）是一種高敏感性的熒光染液，用于檢測瓊脂糖凝膠及聚丙烯酰胺凝膠中的雙鏈DNA和寡核苷酸。當(dāng)染液與核酸結(jié)合后，SYBR Green I 核酸凝膠染液的熒光信號會明顯增強，因此經(jīng)SYBR GreenI 核酸凝膠染液染色的凝膠顯示出非常好的信躁比，沒有背景熒光。為獲得*的結(jié)果，凝膠在跑膠后再進行染色。SYBR GreenI 核酸凝膠染液用于低含量的PCR產(chǎn)物，凋亡研究及異源雙鏈分析中少量DNA的檢測較為理想?？蓱?yīng)用于：DNA和RNA的檢測；SSCP及異源雙鏈分析。
SYBR Green I 核酸染料特點
　　高靈敏：至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。 　　信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低。 　　操作簡單：無須脫色或沖洗。 　　適用范圍廣：可適用于多種電泳分析。 　　使用方便：不影響其它修飾酶作用。 　　經(jīng)濟：價格比銀染便宜。
電泳用SYBR Green I 使用方法
SYBR Green I預(yù)染方法
　　1. 該方法適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳 　　2. 工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SYBR GreenⅠ稀釋100倍，即為SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一個月以上。 　　3. 制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。 　　4. 樣品染色：向分析樣品中加入SYBR GreenⅠ工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使SYBR GreenⅠ與樣品中DNA充分結(jié)合。SYBR GreenⅠ工作液加入量為總上樣量的1/10。 　　5. DNA Marker染色：將5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SYBR GreenⅠ與DNA充分結(jié)合。 　　6. 上樣、電泳：按常規(guī)操作。
SYBR Green I后染方法
　　1. 按照常規(guī)方法進行電泳。 　　2. 用PH 7.0 - 8.5 的緩沖液（如：TAE，TBE 或 TE），按照10000：1的比例稀釋SYBR GreenⅠ濃縮液，混勻，制成染色溶液。 　　3. 將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室溫振蕩染色10-30分鐘，染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色，將配好的工作溶液輕輕地倒在膠板上，讓工作液均勻地覆蓋整個膠板，并染色30分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。 　　4. 用藍盾TM觀測。藍光可透過玻璃，觀測聚丙烯酰胺凝膠時，可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入藍盾TM內(nèi)觀測。
SYBR Green I使用注意事項
　　1. 在"SYBR GreenⅠ預(yù)染色方法"中，電泳時間不要超過2小時，否則SYBR GreenⅠ會從DNA上分離出來，會產(chǎn)生彌散狀條帶。 　　2. 在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，SYBR Green I 可以全部從雙鏈核酸上去掉。 　　3. 如果想對用 SYBR Green I 染過的膠進行 Southern blots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS。 　　4. 在紫外照射透視下，與雙鏈 DNA 接合的 SYBR Green I 呈現(xiàn)綠色熒光。如果膠中含有單鏈 DNA 則顏色為橘黃而不是綠色。 　　5. SYBR Green對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器