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北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司

干細(xì)胞培養(yǎng)

時間:2013-4-17閱讀:522
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 近年來,干細(xì)胞不止是生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的熱點,也常是人們茶余飯后的談資。從*否決干細(xì)胞研究法案到黃禹錫造假風(fēng)波,干細(xì)胞研究總是占據(jù)報紙的大幅版面。為什么這么熱門?因為干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞(北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司),有望用來修復(fù)那些被疾病和創(chuàng)傷所破壞的各種各樣的細(xì)胞和組織,從而為多種慢性疾病的治療帶來了希望,例如帕金森病、老年癡呆癥、糖尿病、心血管疾病,甚至癌癥。

干細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞來源的不同,可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞兩大類。當(dāng)受精卵分裂發(fā)育成囊胚時,內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)(Inner Cell Mass)的細(xì)胞即為胚胎干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞具有性,可以自我更新并具有分化為體內(nèi)所有組織的能力。進(jìn)一步說,胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的性,能分化出成體動物的所有組織和器官,包括生殖細(xì)胞。成體干細(xì)胞是指存在于組織中的未分化細(xì)胞,該種細(xì)胞能夠自我更新并能夠分化形成組成該類組織的細(xì)胞,包括間充質(zhì)細(xì)胞、造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞等。成年動物的許多組織和器官,比如表皮和造血系統(tǒng),具有修復(fù)和再生的能力,成體干細(xì)胞在其中起著關(guān)鍵的作用。然而與胚胎干細(xì)胞不同的是(北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司),這種干細(xì)胞在培養(yǎng)時生存時間有限制并且只能分化成有限的幾種細(xì)胞類型。

目前干細(xì)胞有幾百種之多,而且它們的培養(yǎng)特性也各異,就重復(fù)性而言,干細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域還面臨著極大的困難。為干細(xì)胞提供一個*的培養(yǎng)條件,尤其是保證細(xì)胞處于未分化狀態(tài)或者在需要的時候使細(xì)胞向?qū)R坏姆较蚍只歉杉?xì)胞研究中zui大的挑戰(zhàn)。

干細(xì)胞的培養(yǎng)
zui初的胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)都少不了小鼠胚胎成纖維(MEF)細(xì)胞制備的滋養(yǎng)層。MEF向培養(yǎng)基中分泌一些未知因子,能支持干細(xì)胞生長。后來,研究人員發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)小鼠ES 細(xì)胞時,向培養(yǎng)基中添加白血病抑制因子(LIF)可以代替滋養(yǎng)層細(xì)胞而維持ES 細(xì)胞的自我更新能力,但LIF并不能維持人類胚胎干細(xì)胞(hESC)的未分化狀態(tài)。因此大部分實驗室還在使用細(xì)胞滋養(yǎng)層。然而,MEF細(xì)胞在體外的增殖能力較差,且隨著傳代次數(shù)增加,其支持hESC生長的能力降低,需要不斷地制備原代MEF細(xì)胞,昂貴、費時。而且鼠源性的MEF可能引起動物源性病原體或支原體的污染,因此很多研究組嘗試用各種人源細(xì)胞直接作為飼養(yǎng)層。但也不是所有人源細(xì)胞都能很好地支持hESC的生長,而且用異體來源的細(xì)胞仍存在一定的交叉污染危險
http://www.kindlingtouch.com/st103691/Product_5642681.html。基于這些原因,研究人員希望能開發(fā)出無滋養(yǎng)層、無血清、成分確定的hESC培養(yǎng)體系。

BD生物科學(xué)公司、加拿大StemCell公司就和的WiCell研究所建立了戰(zhàn)略合作關(guān)系,開發(fā)出更優(yōu)化、無滋養(yǎng)層的人胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境,包括成分確定的無血清培養(yǎng)液和合適的培養(yǎng)基質(zhì)。

StemCell公司優(yōu)化了WiCell 研究所的mTeSR 1培養(yǎng)液配方,并將其商品化。mTeSR 1培養(yǎng)液是一種*、成分確定的無血清培養(yǎng)液。在BD公司Matrigel 基質(zhì)上,mTeSR 1可用于未分化狀態(tài)hESC的維持和擴(kuò)增,而不必添加其他生長因子。在mTeSR 1中未分化的hESC保持多能標(biāo)記如Oct-3/4和SSEA-3的高表達(dá)。在畸胎瘤測定中,hES可分化成三種胚層的能力也證明了其多能性。

hESC理想的培養(yǎng)環(huán)境包括無血清及成分確定的培養(yǎng)液和一個適合hESC生長的培養(yǎng)表面。BD的Matrigel 基質(zhì)大家應(yīng)該都聽說過吧,是一種從Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠惡性腫瘤基膜分離的再生基膜,主要成分是層粘蛋白、IV型膠原和蛋白糖苷肝素硫酸鹽,還包含了生長因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等。BD公司在此基礎(chǔ)上開發(fā)了一種更適合hESC生長的優(yōu)化表面——Matrigel hESC-qualified Matrix,能與StemCell公司的mTeSR 1相匹配,為hESC研究提供了必需的重復(fù)性和一致性。mTeSR 1和BD Matrigel™ 基質(zhì)的結(jié)合使用可培養(yǎng)各種WiCell hESC多至20代http://www.kindlingtouch.com/st103691/Product_5642681.html

Invitrogen也推出了StemPro hESC SFM——一種*確定的無血清培養(yǎng)基,用于培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞。它已經(jīng)證明能在一系列hESC中維持細(xì)胞的多能性。Geltrex matrix則是與StemPro hESC SFM配套使用的基質(zhì)。它的主要成分與Matrigel類似,但簡化了生長因子,使批次間穩(wěn)定性提高,并模擬了體內(nèi)的環(huán)境,為細(xì)胞培養(yǎng)提供了一種3D腳手架,使細(xì)胞真正感到賓至如歸http://www.kindlingtouch.com/st103691/Product_5642681.html。另外,Invitrogen還推出了*用于人類胚胎的*確定的基質(zhì)——CELLstart。它不含細(xì)胞來源成分,可以支持hESC貼壁和擴(kuò)增,并維持多能性和分化能力。CELLstart也能用于間充質(zhì)干細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞。

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