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RPMI-1640培養基的制備以及說明
2013-11-19 閱讀(4160)
在實驗中我們經常會用到RPMI-1640培養基，但遺憾的是關于RPMI-1640培養基卻很少有人仔細研究。RPMI-1640培養基是RoswellParkMemorialInstitute的縮寫，代指洛斯維，1640則是培養基代號。其中含有10%胎牛血清。
實驗中使用的RPMI-1640培養基通常都需要自己配制。而配制過程中需要注意到很多細節，否則就會影響到RPMI-1640培養基的效果。總結一下關于RPMI1640培養基的需知，可分為以下幾點：
1.配制培養基新制備的三蒸水（即經過三次蒸餾收集的水，一般多用于，生物和醫療上的檢驗）是*選擇。一般在試驗前當天制備，前一天也可。注：調節pH值的酸堿溶液也應該使用這種水配制。
2.培養液（配制方法不仔細介紹，自己可查）配好后，先抽取少許放入培養瓶內，置于37℃溫箱內24～48hr，用以檢測培養液是否有污染。
3.溶解培養基，過程為將干粉培養基溶于總量1/3的水中，再用水洗包裝袋內面兩次，再倒入培養液中，振蕩即可。注：一般不要加熱助溶。
4.補加試劑，即是根據包裝袋說明和試驗需要加入NaHCO3（2.0g）、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等試劑。
5.加抗生素，一般青霉素終濃度為100U/ml，鏈霉素為100U/ml。但市售青霉素為80萬U/瓶，可溶于4ml體積，所以每一升培養液中加0.5ml即可。市售鏈霉素則為100萬U/瓶，可溶于5ml體積，所以每一升培養液中也加0.5ml即可。注：無鏈霉素的情況下，也可用慶大霉素代替，終濃度調為50～200U/ml即可。
6.調pH值，培養基中加水到900ml（在需要加10%小牛血清的情況下），然后用5%NaHCO3調節pH到7.2為止。
7.過濾除菌：zui宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張，上層為0.45um，下層為0.22um，可保證過濾的效果。注：濾膜正面（即是光面）要朝上。過濾后分裝于小瓶中（100或200ml）。
8.每次配液，都需要的其他輔助性液體（例如Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）也可以同時配制，分別再過濾。
9.每次配液量以兩周左右為zui宜，一次配液不可太多，太多則會造成營養成分（主要為谷氨酰胺）的損失，zui后造成實驗繁瑣或者污染。
10.zui后，必須注意制備培養基的器皿清洗要干凈，烤干后備用（濾器、濾膜、量筒、移液管及盛放培養基的小瓶等存放和轉移培養基液體的器具都應進行滅菌）。
注意：RPMI-1640培養基中需加入10%的小牛血清。關于小牛血清加入的注意事項不做仔細介紹，自己可查。培養基的配制過程及其注意事項大家都已清楚，但僅是清楚還并不足夠，我們更多的要動手去做。實踐不僅是檢驗真理惟一標準，更是檢驗一個人的標準。
實驗中使用的RPMI-1640培養基通常都需要自己配制。而配制過程中需要注意到很多細節，否則就會影響到RPMI-1640培養基的效果。總結一下關于RPMI1640培養基的需知，可分為以下幾點：
1.配制培養基新制備的三蒸水（即經過三次蒸餾收集的水，一般多用于，生物和醫療上的檢驗）是*選擇。一般在試驗前當天制備，前一天也可。注：調節pH值的酸堿溶液也應該使用這種水配制。
2.培養液（配制方法不仔細介紹，自己可查）配好后，先抽取少許放入培養瓶內，置于37℃溫箱內24～48hr，用以檢測培養液是否有污染。
3.溶解培養基，過程為將干粉培養基溶于總量1/3的水中，再用水洗包裝袋內面兩次，再倒入培養液中，振蕩即可。注：一般不要加熱助溶。
4.補加試劑，即是根據包裝袋說明和試驗需要加入NaHCO3（2.0g）、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等試劑。
5.加抗生素，一般青霉素終濃度為100U/ml，鏈霉素為100U/ml。但市售青霉素為80萬U/瓶，可溶于4ml體積，所以每一升培養液中加0.5ml即可。市售鏈霉素則為100萬U/瓶，可溶于5ml體積，所以每一升培養液中也加0.5ml即可。注：無鏈霉素的情況下，也可用慶大霉素代替，終濃度調為50～200U/ml即可。
6.調pH值，培養基中加水到900ml（在需要加10%小牛血清的情況下），然后用5%NaHCO3調節pH到7.2為止。
7.過濾除菌：zui宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張，上層為0.45um，下層為0.22um，可保證過濾的效果。注：濾膜正面（即是光面）要朝上。過濾后分裝于小瓶中（100或200ml）。
8.每次配液，都需要的其他輔助性液體（例如Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）也可以同時配制，分別再過濾。
9.每次配液量以兩周左右為zui宜，一次配液不可太多，太多則會造成營養成分（主要為谷氨酰胺）的損失，zui后造成實驗繁瑣或者污染。
10.zui后，必須注意制備培養基的器皿清洗要干凈，烤干后備用（濾器、濾膜、量筒、移液管及盛放培養基的小瓶等存放和轉移培養基液體的器具都應進行滅菌）。
注意：RPMI-1640培養基中需加入10%的小牛血清。關于小牛血清加入的注意事項不做仔細介紹，自己可查。培養基的配制過程及其注意事項大家都已清楚，但僅是清楚還并不足夠，我們更多的要動手去做。實踐不僅是檢驗真理惟一標準，更是檢驗一個人的標準。
