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elisa實驗優(yōu)化包被的三大條件
2013-9-4 閱讀(12445)
一、如何挑選包被抗原
包被抗原可分為天然蛋白，重組蛋白和小分子抗原三類。天然蛋白通過直接吸附凈化包裝要求，許多雜質(zhì)抗原的間接方法可以捕獲數(shù)據(jù)包（*和靶抗原反應(yīng)物質(zhì)如直接吸附在酶標(biāo)板，然后通過抗原抗體的固相的特異性反應(yīng)）。重組蛋白的純化通常可以直接涂。小分子抗原如肽和一些小分子有機化合物，分子量太小，很難直接吸附在酶標(biāo)板，通常*和不相關(guān)的蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白，耦合，耦合的固相載體上的吸附。
二、如何挑選包被液
一般是一個ph9.6碳酸鹽緩沖液，如果包被抗原在堿性條件下不穩(wěn)定，也可以用pH7.2磷酸鹽緩沖溶液。
三、如何選擇包被溫度
通常在4-8度為2小時通宵或37度的條件下，我們強烈建議4-8溫度范圍，有利于保持蛋白的活性。選擇4層濃度包被固相載體和涂層性能改變物質(zhì)的*濃度，總蛋白涂層濃度1-5ug／ml，應(yīng)該明確的涂層的*濃度的特異性抗原的實驗測定。
包被后是否需要封閉?封閉體系又應(yīng)該怎么選?
封閉是否必要，取決于酶聯(lián)免疫吸附模型和具體實驗條件。一般來說，雙抗體夾心法，只要酶標(biāo)記物是高活性的，操作清洗*，無閉也可以得到滿意的結(jié)果。測定及間接的方法，一般的封閉是*的。常見的密封膠0.05% - 0.5%牛血清白蛋白，10%胎牛血清，明膠1%，脫脂奶粉5%，abmart建議使用5%脫脂奶粉，廉價和密封能力，但脫脂奶粉5%只適合短期使用，不要保存，因此使用較少的試劑盒。
