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3篇Science論文解析蛋白質合成機制

閱讀:477發布時間:2013-7-1

在信使RNA (mRNA)翻譯為蛋白質的過程中,轉移RNA (tRNA)和mRNA必須同步移動通過核糖體的內部通道,否則就會有移碼突變風險,生成異常的蛋白質。科學家們已經了解了這一過程背后的一些生物化學機制,證實糖核體具有一些移動的元件,使得它以每秒20次輕微移動的速率讓tRNA快速地通過。然而,解析中間狀態時核酸、核糖體和酶之間的并非是易事。

一期(6月27日)的《科學》(Science)雜志上同期發表了3篇研究論文,闡明了時間為50毫秒的過程。通過捕獲核糖體易位(translocation)幾個中間階段的晶體結構,科學家們將這一復雜分子機器的移動元件進行了成像。

“這是十多年來我們的一個重要目標,實現它非常的困難。這些動態的復合物并不會坐下來等著你給它們拍照,”加州大學圣克魯斯分校教授Harry Noller說。他的實驗室一直在針對核糖體和核糖體RNA開展一些zui基礎的研究。

在這一易位舞蹈過程中有4個重要的參與因子需要進行捕獲,它們分別是核糖體、tRNA、mRNA和延伸因子EF-G。EF-G催化了復合物移動通過核糖體。Noller實驗室將前三者進行了共同培育,而讓EF-G仍然附著在核糖體上以對其進行結晶至關重要。Noller和同事們將EF-G與不可水解GTP類似物GDPNP,或抗生素*(fusidic acid)一起進行了孵育,后兩者可以阻止EF-G與核糖體分離。

研究小組在捕獲了正易位的核糖體后,利用10天時間結晶出了這一復合物。收獲晶體之后,研究人員將它們冷凍在液氮中,用X射線進行了掃描。對衍射數據進行了分析。

在以往的研究中,Noller課題組曾證實tRNA的一端首先沿著大亞基移動,而另一端則處于一種所謂的混雜(hybrid)狀態。這一步涉及核糖體30s亞基的旋轉,可自然發生。當前的研究證實,在接下來的步驟中,mRNA和tRNA移動通過核糖體需要能量;30S亞基頭部旋轉15-18度。“30S亞基頭部使得tRNA旋轉,mRNA與之一起移動。這就是第二步發生的經過,”Noller說。

如果mRNA和tRNA不*同步,密碼子將會被錯誤翻譯,導致潛在無功能或是有毒的蛋白質。Noller發現兩個普遍保守的核糖體RNA (rRNA)堿基插入到了mRNA的堿基之間,阻止了易位倒退。

在另外兩篇研究論文中,諾貝爾獎獲得者Venkatraman Ramakrishnan,和劍橋MRC分子生物學實驗室的同事們報告了處于易位過程中另一中間狀態的一個核糖體的晶體結構。而來自加州大學伯克利分校的Arto Pulk和同事們則描述了不同版本的核糖體亞基旋轉的中間狀態晶體結構。

Noller說:“我們現在擁有了處于易位周期幾個關鍵點的結構。你可以說我們獲得了四種不同的狀態。但Disney想獲得400個結構,你現在可以開始在現實生活中觀看到這一易位電影。”


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