上海泛柯帶您深度觀察細胞傷口愈合實驗

   上海泛柯實業有限公司長期經營elisa試劑盒及生物試劑、酶、細胞等生物化學試劑。各類產品齊全，價格實惠，質量有保證，并且可以提供免費代測，請您放心選購，咨詢！

  試劑盒性能:

·準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。

·靈敏度：zui低檢測濃度小于10 pg/ml。

·特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

·重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

有效期：6個月

用途：本產品僅供科學研究

規格：48T/96T(可提供免費代測服務)

   ELISA試劑盒實驗注意事項
1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3. 樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。
4. 實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
5. 酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
6. 建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
7. 牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
8. 本試劑盒定量范圍為20-640ng/L，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（20-640ng/L范圍內），乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。
9. 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
10. 為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、*和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。
11. 試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。
12. 若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
  ELISA試劑盒實驗步驟
  1. 細胞在含有10%FBS的DMEM培養基中生長。
  2. 細胞以一定密度接種到24孔細胞培養板中，生長24小時后，單層細胞融合度應達到70-80%。
  3. 不要更換培養基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養細胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號的槍頭調節。劃痕在同一方向成一條直線。
  4. 在垂直與*條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。
  5. 計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
  6. 每孔添加新鮮培養基。
  7. （培養基中含有某些成分，如抑制/促進細胞遷移和/或增殖的化學物質）。
  8. 細胞生長48小時（或根據時間需要）。
  9. 1xPBS清洗細胞兩次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。
  10. 0.1%的結晶紫（2%乙醇溶解）染色30分鐘。
  11. 染色的單層細胞選取不同的視野，顯微鏡拍照。gap的距離可通過Photoshop或ImagJ軟件測量.為了降低實驗結果的可變性，建議每孔選擇多個視野觀察，每組做多個重復。
  12. 劃痕后，用培養基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細胞。

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