熒光定量PCR檢測HBV-DNA ELISA方法測定

 熒光定量PCR技術(shù)具有靈敏度高、特異性強等特點，能更準(zhǔn)確反映出HBV感染者血清中病毒含量，ELISA法檢測人體對乙型肝炎（乙肝）病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)。將兩者結(jié)合，分析HBV感染者整個病程中血清抗原、抗體的轉(zhuǎn)化過程及與HBV DNA的相關(guān)性。 1 資料與方法 1.1  一般資料：選取2011年1月～2011年12月我院住院、門診乙型肝炎患者、體檢者共3 120例及健康對照20例。

1.  HBV DNA熒光定量檢測：儀器采用ROTOR GENE 3000實時熒光定量PCR儀。HBV DNA試劑盒購自購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。定量結(jié)果采用求算對數(shù)平均值的方法來計算HBV DNA平均拷貝數(shù)。 1.3  HBV免疫學(xué)標(biāo)志物檢測：采用ELISA方法檢測HBV標(biāo)志物，ELISA試劑盒購自廈門英科新創(chuàng)科技有限公司。 人ELISA試劑盒

2 結(jié)果　　根據(jù)乙肝五項指標(biāo)的不同，我們對3 120例血清標(biāo)本的分析結(jié)果做分組，并統(tǒng)計HBV DNA結(jié)果。HBV DNA檢測結(jié)果與免疫學(xué)指標(biāo)結(jié)果的比較 乙肝五項指標(biāo) 例數(shù) HBV DNA陽性數(shù)[例（%）] HBV DNA含量（IU/ml） 1.HBsAg、HBeAg、抗HBc陽性組 1 148 1 111（96.8）① 7.94±0.34 2.HbsAg、抗Hbe、抗HBc陽性組 1 357 699（51.5）② 4.57±2.07 3.HBsAg、抗HBc陽性組 551 267（48.5）③ 4.33±1.12 4.抗HBs陽性組 64 2（3.1） 3.96 5.陰性正常人血清 20 1（5.0） 3.11 注：②、③與①比較，P＜0.01 3 討論　　我們對3 120例乙肝患者及體檢者、20例乙肝五項指標(biāo)陰性的健康對照同時進(jìn)行免疫學(xué)指標(biāo)和HBV DNA熒光定量PCR檢測。人ELISA試劑盒

說明HBeAg（+）乙肝患者HBV處于大量復(fù)制階段，患者具有高度傳染性，與文獻(xiàn)報道一致[1]。2組 HBV DNA檢出率為51.5%，3組HBV DNA檢出率為48.5%，HBV DNA拷貝數(shù)差異很大，說明免疫學(xué)指標(biāo)結(jié)果相同的患者，其體內(nèi)HBV DNA濃度存在很大差異。2組HBV DNA檢出率達(dá)51.5%，HBV DNA含量較1組低，因此，系統(tǒng)轉(zhuǎn)換并不能說明HBV停止復(fù)制，可能與病毒變異等因素有關(guān).說明患者體內(nèi)是否有病毒復(fù)制及其拷貝數(shù)單靠ELISA方法檢測HBV標(biāo)志物是無法準(zhǔn)確判斷的，而必須進(jìn)行HBV DNA的定量檢測。抗HBs是保護(hù)性抗體，但本實驗中64例抗HBs陽性者中仍有2例檢出HBV DNA，這與文獻(xiàn)報道的結(jié)果相符，說明抗HBs陽性者并非*沒有傳染性，因此對抗HBs陽性者判斷其是否具有傳染性仍需通過檢測HBV DNA來加以分析。人ELISA試劑盒　　

值得注意的是HBVM全陰的20例標(biāo)本中，有1例PCR陽性.這種陽性的存在，可能是病毒感染早期，抗原﹑抗體尚未形成；患者免疫功能低下，不產(chǎn)生免疫應(yīng)答或患者出現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象，ELISA無法測出相應(yīng)的抗原﹑抗體．或者是HBV s區(qū)基因變異致HbsAg抗原性變異，不能被ELISA方法檢出；或者前C區(qū)變異致不能產(chǎn)生HBeA。人ELISA試劑盒

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