細胞實驗技術-細胞融合
【實驗目的】
掌握細胞融合原理、應用 PEG 融合細胞的方法以及細胞融合率的計算。
【實驗用品】
一、材料 雞紅細胞
二、器材和儀器：顯微鏡、離心機、水浴箱、刻度離心管、試管、載玻璃片、蓋玻片
三、試劑 50％PEG（MW4,000）、Hanks 液（pH7.4）
【實驗內容】
一、原理
細胞融合（Cell fusion），即在自然條件下或用人工方法（生物的、物理的、化學的）使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的過程。人工誘導的細胞融合，在六十年代作為
一門新興技術而發展起來。由于它不僅能產生同種細胞融合，也能產生種間細胞的融合，因此細胞融合技術目前被廣泛應用于細胞生物學和醫學研究的各個領域。
細胞融合的誘導物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺病毒（Sendai virus），聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和電脈沖。目前應用zui廣泛的是聚乙二醇，因為它易得、簡便，且融合效果穩定。PEG 的促融機制尚不*清楚，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發生結構重排。
二、方法
（1）取新鮮雞血以 0.85％生理鹽水制成 10％的懸液。
（2）稱取 0.5 克 PEG（MW=4,000）放入試管內，在酒精燈上融化之，迅速加入 0.5ml 預熱的 Hanks 液混勻制成 50％的 PEG 溶液。放入 37℃水浴中待用。
（3）取上述 10％的雞紅細胞懸液 1ml 放入離心管中，再加入 5ml Hanks 液混勻，然后以 1,000rpm 離心 5 分鐘，小心棄去上清，用指彈法將細胞團塊彈散。
（4）取上述 50％PEG 溶液 0.5ml，在 1 分鐘內滴加到雞紅細胞懸液，邊加邊輕輕搖動混勻。待 PEG 全部加入后靜置 1 分鐘左右。此全部過程都要求在 37℃水浴內進行。
（5）緩慢滴加 9ml Hanks 液以終止 PEG 的作用，在 37℃水浴內靜置 5 分鐘。
（6）離心棄上清后，取一滴融合后的細胞懸液滴片，加蓋片鏡檢。
三、結果觀察
在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細胞膜融合在一起，形成一個異核體細
胞。要注意辨別融合細胞與重疊的雞紅細胞。
