植物基因組DNA的RFLP

時間：2013-6-6閱讀：338

植物基因組DNA的RFLP

實驗原理

DNA多態性是指DNA堿基順序的差異性。這種差異性不僅存在于不同的植物之間，也存在于同一種植物的不同個體之間。RFLP多態性是指DNA限制性內切酶酶切片段長度的多態性（restniction fragment length olymophorphism）。由于堿基順序的差異，在不同的種或同一個種的不同個體之間，它們的基因組DNA限制性內切酶位點的種類和數目不同，經特定的限制性內切酶切割后，所產生的限制性酶切片段在大小（長度）和數目方面自然也存在著差異。通過瓊脂糖凝膠電泳分離和溴化乙錠染色，在紫外檢測儀下觀察，即可直接看到這種差異。電泳分離后，通過Southern雜交也可顯示出已知DNA的差異。

實驗試劑

1. 限制性內切酶

2. 10×限制性內切酶緩沖液

3. 0.5M EDTA（pH 8.0）

4. 溴化乙錠

5. 瓊脂糖

實驗設備

1. 電泳儀和電泳槽

2. 微量離心管

3. 低溫冰箱

4. 37℃水浴鍋

實驗材料

從不同植物或同一植物不同個體分離出的基因組DNA。

實驗步驟

1. 限制性內切酶酶切

1）將在-20℃冷凍的DNA在冰上融化。

2）取8支微量離心管按下表所示作好標記，并依次加入所需成分。

	品種I		品種II		品種I－1		品種II－2
	單酶切 1#	雙酶切 2#	單酶切 3#	雙酶切 4#	單酶切 5#	雙酶切 6#	單酶切 7#	雙酶切 8#
DNA	10	10	10	10	10	10	10	10
10×緩沖液	2	2	2	2	2	2	2	2
Eco R I		1	1	1	1	1	1	1
Hind III		1		1		1		1
無菌水	7	6	7	6	7	6	7	6
總體積（ul）	20	20	20	20	20	20	20	20

3）混勻，慢速離心2秒，使溶液全部聚于管底。

4） 37℃保溫2－3小時。

5）加入1／10體積的0.5M EDTA溶液終止反應。

2. 瓊脂糖凝膠電泳分析

日韩午夜在线观看,色偷偷伊人,免费一级毛片不卡不收费,日韩午夜在线视频不卡片

上海泛柯實業有限公司

上海泛柯實業有限公司

植物基因組DNA的RFLP

會員登錄

收藏該商鋪

提示