ELISA法小鼠腦組織提取詳細步驟

1,自行割取小鼠腦組織

2,4℃預冷的PBS漂去組織血漬，濾紙吸干殘留的PBS；

3,稱重，加入裂解液勻漿（在冰上）；

4,將得到的勻漿液用液氮反復凍融3次；

5,室溫靜置30mins，4℃15000r/min離心1h，取上清，分裝，-80℃保存。

簡介：目的建立動物組織內P53蛋白的免疫檢測分析方法,為P53生物藥物的代謝分布研究提供檢測手段。方法辣根過氧化物酶（HRP）標記抗P53蛋白單克隆抗體3P40,應用標記后的抗體及重組P53蛋白的檢測,建立競爭性ELISA檢測方法;應用此方法建立血清樣品中P53蛋白標準曲線,測定腹腔注射P53后不同時間小鼠血清中P53濃度。結果利用親和層析純化的3P40,進行HRP標記,ELISA檢測3P40HRP滴度可達1∶200 000;建立的競爭性ELISA方法可以檢測PBST中P53蛋白,靈敏度達30 ng/ml,日內精密度較高,相對標準偏差（RSD）小于5%,體現較好的重復性;分別應用正常小鼠血清、PBST稀釋的重組P53蛋白樣品進行競爭性ELISA檢測,結果顯示小鼠血清成分對P53蛋白檢測有一定的影響;應用血清制備P53蛋白的標準曲線,檢測了腹腔注射P53蛋白后不同時間點小鼠血清樣品中的P53蛋白濃度。結論進行了抗P53單克隆抗體3P40的HRP標記,建立了競爭性ELISA方法,可用于P53蛋白藥物血藥濃度檢測。

樣本暫時不測應在-80°冷凍保存，一般可以放置6個月左右，-20°可保存3個月,盡量避免反復凍融。     本文由卡邁舒（Kmaels）生物科技王磊整理編輯~更多詳情登陸我司主頁瀏覽~~