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卡邁舒(上海)生物科技有限公司

小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒說明書

時間:2013-6-4閱讀:414
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 小鼠轉化生長因子β1TGF-β1)酶聯(lián)免疫分析

 
試劑盒使用說明書
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中轉化生長因子β 1TGF-β1)含量。實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠轉化生長因子β 1TGF-β1)水平。用純化的小鼠轉化生長因子β 1TGF-β1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入轉化生長因子β 1TGF-β1),再與 HRP標記的轉化生長因子β 1TGF-β1)抗體結合,形成抗體 -抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉化生長因子β 1TGF-β1)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度( OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠轉化生長因子β 1TGF-β1)濃度。
試劑盒組成

 

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1
7
終止液
6ml×1
2
酶標試劑
6ml×1
8
標準品(240pg/ml
0.5ml×1
3
酶標包被板
12孔×8
9
標準品稀釋液
1.5ml×1
4
樣品稀釋液
6ml×1
10
說明書
1
5
顯色劑 A
6ml×1
11
封板膜
2
6
顯色劑 B
6ml×1/
12
密封袋
1

 

標本要求
1           標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于 -20℃保存,但應避免反復凍融
2           NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。
 
操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3
8.洗滌:操作同 5
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零, 450nm波長依序測量各孔的吸光度( OD值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。

 

120pg/ml
5號標準品
150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液
60pg/ml
4號標準品
150μl5號標準品加入 150μl標準品稀釋液
30pg/ml
3號標準品
150μl4號標準品加入 150μl標準品稀釋液
15pg/ml
2號標準品
150μl3號標準品加入 150μl標準品稀釋液
7.5pg/ml
1號標準品
150μl2號標準品加入 150μl標準品稀釋液

 

OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準 .

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

 

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