名稱：人游離血紅蛋白(f-Hb)ELISA檢測試劑盒

規格：48T/96T

原理：ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術

包括：人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等等

標本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人游離血紅蛋白(f-Hb)ELISA檢測試劑盒操作流程如下：

（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。　（2）酶標板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。　

（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。　

（6）洗板，同（4）。　

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。　

（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。　

（9）洗板，同（4）。　

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。　

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。　

（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

注：所用溶液配方

(1) PBS：稱取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl，加雙蒸水至1000ml。

（2）包被緩沖液：稱取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3，加雙蒸水至 1000m1。

（3）洗滌液(PBST)：含0.05% Tween-20的PBS。

（4）稀釋液：含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS，主要用以稀釋抗體、標準品、樣品。

（5）TMB顯色液：稱取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g檸檬酸，加雙蒸水至1O0ml，配成檸檬酸-磷酸緩沖溶液。用10.5 ml 檸檬酸-磷酸緩沖溶液溶解1錠TMB，再加入35μl 3% H2O2

（6）細胞裂解液：1% TritonX-100，137mmol/L NaCl，20mmol/L Tris-HCl，2mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，pH 7.4。（其中PMSF溶于異丙醇中，配成1O mmo/L，-20℃ 貯存備用。保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月

卡邁舒（上海）生物科技有限公司/ Kmaels (Shanghai) biotechnology co., LTD主營各種屬Elisa試劑盒，產品服務于生物科研領域。致力為中國生命科學研究領域的科研工作者提供高品質產品，產品囊括細胞因子系列，內分泌系列，特種蛋白系列，腫瘤以及自身免疫系列等多個優勢系列。產品種類齊全指標上千萬種，原料均采用進口試劑，引進國外生產工藝，質量穩定可靠，性價比高，深受廣大用戶的信賴。

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