中文名稱:人生長分化因子15(GDF15)elisa試劑盒
英文名稱:
人生長分化因子15(GDF15)elisa試劑盒上海邦奕——專業(yè)的elisa試劑盒供應(yīng)商,本公司所有產(chǎn)品僅用于科研,不得用于臨床,詳細(xì)信息請(qǐng)?jiān)诰€咨詢我公司銷售人員!
人生長分化因子15(GDF15)elisa試劑盒用途:
本試劑盒僅供科研使用,定量檢測(cè)細(xì)胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biāo)本中人生長分化因子15(GDF15)的含量。
人生長分化因子15(GDF15)elisa試劑盒原理:
采用雙抗體夾心法測(cè)定人生長分化因子15(GDF15)水平。用純化的人生長分化因子15(GDF15)抗體包被微孔板,制成固相載體,實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,并加入HRP標(biāo)記的抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,反復(fù)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,再用硫酸終止反應(yīng),轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的人生長分化因子15(GDF15)含量呈正相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在450nm波長測(cè)定吸光度(OD值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算測(cè)試樣品中人生長分化因子15(GDF15)濃度。
人生長分化因子15(GDF15)elisa試劑盒試劑盒組成
試劑盒組成 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | |
封板膜 | 2片(96) | |
密封袋 | 1個(gè) | |
酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.6ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 2ml×1 瓶 | 2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
*標(biāo)記的抗體 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃保存 |
儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制:
2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。
樣品收集、處理及保存
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成分是否足夠穩(wěn)定,對(duì)手機(jī)后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20度或者-70度條件下保存,避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測(cè)。
血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測(cè)。
血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測(cè)。
樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
保存:如果樣品不能立即檢測(cè),應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人生長分化因子15(GDF15)elisa試劑盒操作步驟:
取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
分組:取出96孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6 只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul 加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加*標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。
溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙*拍干。
顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。
讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。
注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。
人生長分化因子15(GDF15)elisa試劑盒數(shù)據(jù)計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,即為樣品的實(shí)際濃度。
人生長分化因子15(GDF15)elisa試劑盒注意事項(xiàng):
實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
孵育:嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
安全性
1. 避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人5-羥色胺受體3(5-HTR3)elisa試劑盒保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃
2.有效期:6個(gè)月
本公司對(duì)所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量,并提供良好的售后服務(wù),有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴,請(qǐng)?jiān)谑盏截浳锏?0天內(nèi)以書面形式提出,并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料,我們會(huì)及時(shí)派人解決。所有形式的賠償或退換*于產(chǎn)品本身,不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒,均可享受免費(fèi)代測(cè)服務(wù),并提供技術(shù)指導(dǎo)。
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