中文名稱：無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒（5～15mL）
英文名稱：Endo-Free Plasmid Midi Kit（5～15mL）
產(chǎn)品規(guī)格：50次
發(fā)貨周期：1～3天
產(chǎn)品貨號：BJ-F0163408
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒通過堿裂解法裂解細胞，新型硅基質(zhì)膜高效專一的結(jié)合質(zhì)粒DNA，同時采用特殊的緩沖液系統(tǒng)和除內(nèi)毒素過濾柱，有效去除內(nèi)毒素、蛋白等雜質(zhì)。由本試劑盒所得質(zhì)粒純度高、質(zhì)量穩(wěn)定，特別適用于細胞轉(zhuǎn)染，同時也可用于DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化細菌，內(nèi)切酶消化等下游實驗。 內(nèi)毒素是質(zhì)粒提取中常見的污染物，由于真核細胞對內(nèi)毒素非常敏感，因此，如果質(zhì)粒中含有內(nèi)毒素會大大降低真核細胞轉(zhuǎn)染效率。本試劑盒提供一種簡單、快捷、高效提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒的新方法，提取的質(zhì)粒大限度去除內(nèi)毒素，并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。 保存：室溫(15～30℃) 自備試劑：無水乙醇、異丙醇。 實驗前準備及重要注意事項： 所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環(huán)境穩(wěn)定保存1年，更長時間保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可穩(wěn)定保存6個月。 次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2～8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時間，恢復(fù)至室溫后使用。 次使用前應(yīng)按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。 使用前請先檢查Buffer P2和Buffer E3是否出現(xiàn)結(jié)晶或沉淀，如有結(jié)晶或沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。 注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。 提取質(zhì)粒的量和純度與細菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質(zhì)粒大小、質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關(guān)。 操作步驟： 取5～15mL過夜培養(yǎng)的菌液，加入離心管(自備)中，13000rpm(~16200×g)離心1分鐘收集細菌，盡量吸棄全部上清。 向留有菌體沉淀的離心管中加入500μL Buffer P1(請先檢查是否已加入RNase A)，使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮細菌沉淀。 注意：如果菌塊未*混勻，將會影響裂解效果，使提取量和純度偏低。 向離心管中加入500μL Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻8～10次，使菌體充分裂解，室溫放置3～5分鐘。此時溶液應(yīng)變得清亮粘稠。 注意：溫和混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段。如果溶液未變得清亮，提示可能菌量過大，裂解不*，應(yīng)減少菌體量。 向離心管中加入500μL Buffer E3，立即上下顛倒混勻8～10次，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀，室溫放置5分鐘。13000rpm離心5分鐘，吸取上清，將上清加入過濾柱FM中(已裝入收集管)，13000rpm離心1分鐘過濾，將收集管中的濾液轉(zhuǎn)移到離心管(自備)中。 注意： ① Buffer E3加入后應(yīng)立即混勻，避免產(chǎn)生局部沉淀。 ② 吸附柱的大容積為750μL，所以上清液請分兩次過濾，并混合于同一自備離心管中。 向濾液中加入450μL異丙醇，上下顛倒混勻。 柱平衡：向已裝入收集管的吸附柱中加入200μL Buffer PS，13000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 將步驟5中濾液與異丙醇的混合溶液轉(zhuǎn)移到平衡好的吸附柱(已裝入收集管)中。 13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 注意：吸附柱的大容積為750μL，所以第5步中所得溶液分多次過柱。 向吸附柱中加入750μL Buffer PW(請先檢查是否已加入無水乙醇)，13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。 將吸附柱重新放回收集管中，13000rpm離心1分鐘。 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。 將吸附柱置于一個新的離心管(自備)中，向吸附膜的中間部位加入100～200μL Endo-Free Buffer EB，室溫放置2～5分鐘，13000rpm離心2分鐘。-20℃保存質(zhì)粒。 注意： ① 為了增加質(zhì)粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2～5分鐘，13000rpm離心2分鐘。Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴預(yù)熱，適當(dāng)延長吸附和洗脫的時間，可以增加提取效率。 ② 質(zhì)?？截悢?shù)較低或>10kb時，Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴預(yù)熱，可以增加提取效率。 |
使用方法：本產(chǎn)品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關(guān)規(guī)定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內(nèi)將本產(chǎn)品分裝到自備的、螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產(chǎn)品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內(nèi)密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關(guān)信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內(nèi)。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內(nèi)，擰緊蓋，在容器上標明有關(guān)信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內(nèi)。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的物質(zhì)。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(nèi)(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內(nèi)送達，則應(yīng)盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯(lián)系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
真菌/酵母氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（次氯酸離子）
植物氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（次氯酸離子）
活體組織氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（次氯酸離子）
細胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（過氧亞硝基陰離子）
冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（過氧亞硝基陰離子）
小鼠增殖細胞核抗原 英文名稱： Proliferating Cell Nuclear Aigen 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： PCNA m-Nitrohydrocinnamic acid 中文名： 分子式：C9H9NO4
小鼠早期生長反應(yīng)因子1 英文名稱： Mouse Early Growth Response Protein 1 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： EGR-1 Nandrolone laurate 中文名：月桂酸諾龍 分子式：C30H48O3 度：98.0%
小鼠載脂蛋白H(Apo-H)elisa Naproxen 22204-53-1 中文名： 分子式：C14H14O3 度：98.0%
小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISAKit Lithocholic acid 中文名：石酸 分子式：C24H40O3
小鼠載脂蛋白E(mouse APO E) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進口分裝 Methylprednisolone acetate 中文名：甲基龍醋酸酯 分子式：C24H32O6
無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒（5～15mL）氧化石蒜堿 HPLC≥98% 20mg Humanmelanoma-associatedaigen,MAGEELISAKit 人黑色素瘤相關(guān)抗原(MAGE)elisa 96T/48T 進口分裝
氧化小檗堿 HPLC≥98% 20mg CLIAKitfor26SPSMELISAKit大鼠26S蛋白酶體規(guī)格：48T/96T
氧化型 HPLC≥98% 20mg 飲料甘素(dulcin)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20
藥根堿 HPLC≥98% 20mg MouseL-SelectinELISAKit小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)elisa規(guī)格：96T/48T
野百合堿 HPLC≥99% 20mg 小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)elisa ，英文名： IGFBP3 ELISA Kit
野 HPLC≥98% 20mg 兔子白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒RabbitIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T
野黃芩素 HPLC≥98% 20mg 犬肝堿性0酸酶(L-ALP)試劑盒 Canine Liver Alkaline Phosphatase,L-ALP ELISA Kit
野鷲尾苷 HPLC≥98% 20mg 英文名稱HumanIercellularadhesionmolecular1ELISAKIT人細胞間粘附分子1(ICAM-1)(CD54)ELISAKIT規(guī)格：96T/48T
野菊花內(nèi)酯 HPLC≥98% 10mg 大量藍藻菌基因組DNA氯化銫萃取試劑盒5
野馬追內(nèi)酯A HPLC≥95% 20mg RatIerleukin5,IL-5elisa大鼠白介素5(IL-5)elisa規(guī)格：96T/48T
生物醫(yī)學(xué)實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。
