中文名稱：Ni-NTA 瓊脂糖 (25 ml)
品 牌：QIAGEN
貨 號：30210
利用重力流層析純化His-tagged蛋白
一步純化就可從細胞裂解液中得到純度大于95%的蛋白
高親和力和高結(jié)合能力
可以選擇在天然或變性條件下純化蛋白
預(yù)先加載的即用型基質(zhì)適合任何規(guī)模的蛋白純化
提供自動純化和檢測的方法
Ni-NTA Agarose是親合層析用基質(zhì)，用于純化帶有His標簽的重組蛋白。His標簽上的*殘基能高特異性的結(jié)合到固定的鎳離子上。細胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上，His-tagged蛋白結(jié)合，其他蛋白則流過基質(zhì)。洗滌后，His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
特點 | 參數(shù) |
應(yīng)用 | Proteomics |
磁珠大小 | 45–165 µm |
結(jié)合能力 | Up to 50 mg/ml |
快速蛋白液相色譜 | Yes |
重力流或離心柱 | Gravity flow |
處理 | Manual/Automated |
規(guī)格 | Large scale |
特性 | Batch and column purification |
起始材料 | Cell lysate |
支持/基質(zhì) | Sepharose CL-6B |
標簽 | 6xHis tag |
產(chǎn)量 | 100 µg – 100 mg |
性能
Ni-NTA Agarose中的Ni-NTA與Sepharose CL-6B support偶聯(lián)，具有強結(jié)合能力，非特異性結(jié)合少（參見One-step purification under native conditions）。這種材料對于多數(shù)的生產(chǎn)規(guī)模和柱純化具有的可操作性。Ni-NTA Agarose可單獨訂購，也包含在QIAexpress Kits中。QIAexpress Kits是適用于大腸桿菌His-tagged蛋白高效表達和純化的完整試劑盒。
Ni-NTA 瓊脂糖原理
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于獲得的Ni-NTA（氨基三乙酸鎳）樹脂，對含有6個或以上*殘基（連續(xù)或交替）親合標簽的蛋白選擇能力強。該技術(shù)可在天然或變性條件下，從所有表達體系中一步純化幾乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四個鎳離子螯合位點，與鎳的結(jié)合能力比其他僅有三個金屬螯合位點的金屬螯合純化方法的結(jié)合能力強。多出的一個螯合位點可防止鎳離子脫落，因此具有更強的結(jié)合能力，蛋白純度比金屬螯合純化方法的蛋白純度高。QIAexpress技術(shù)可用于從桿狀病毒、哺乳動物細胞、酵母和細菌等各種表達體系中純化His-tagged蛋白。
操作流程
His-tagged蛋白的純化包括四個步驟：裂解、結(jié)合、洗滌和洗脫（參見Protein purification with the Ni-NTA protein purification system）。使用QIAexpress 技術(shù)純化重組蛋白無需依賴于蛋白的三維結(jié)構(gòu)或6xHis標簽。因此可實現(xiàn)在天然或變性條件下，從稀釋溶液或細胞裂解液中一步純化蛋白。可使用強變性劑和洗滌劑高效溶解和純化受體、膜蛋白和形成包涵體的蛋白。洗滌緩沖液中可包含有能高效去除非特異性結(jié)合產(chǎn)物的試劑（見表）。在溫和條件下加入100–250 mM咪唑作為競爭性洗脫試劑或降低pH值，可洗脫得到純化蛋白。
可與His/Ni-NTA共同使用的試劑 變性劑 | 洗滌劑 | 還原劑 | 其他 | 鹽 | *儲存 |
6 M Gu·HCl | 2% Triton X-100 | 20 mM β-ME | 50%甘油 | 4 M MgCl2 | 至多30%的乙醇 |
8 M尿素 | 2% Tween 20 | 10 mM DTT | 20%乙醇 | 5 mM CaCl2 | 或100 mM NaOH |
| 1% CHAPS | 20 mM TCEP | 20 mM咪唑 | 2 M NaCl |
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應(yīng)用
Ni-NTA基質(zhì)可靠的一步純化得到His-tagged蛋白，適用于多種應(yīng)用，包括：
結(jié)構(gòu)和功能研究
蛋白結(jié)晶，用于三維結(jié)構(gòu)檢測
蛋白與蛋白，蛋白與DNA相互作用研究
抗體制備
純化放大的生產(chǎn)規(guī)模
