HCCLM3 細胞,人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞細胞特性：
1、細胞活力
原代取材活力≥90
產(chǎn)品復(fù)蘇率≥60
培養(yǎng)兩天就能清晰看到軸突與樹突，培養(yǎng)時間可長達13-16天。
2、細胞純度
80以上細胞神經(jīng)元細胞標記物為陽性
質(zhì)量控制：本產(chǎn)品經(jīng)過了細菌、真菌、霉菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原體檢測。
運輸保存：采用干冰保存運輸
用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療
細胞生長：貼壁生長,在軟瓊脂中成簇生長，并可懸浮生長
細胞檢測：細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
HCCLM3 細胞,人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞關(guān)于細胞培養(yǎng)溫馨小貼士：
細胞的凍存方法
1．細胞：選對數(shù)生*細胞，收集細胞24小時前換液一次。
2．計數(shù)：按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液，計數(shù)，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。
3．凍存液：先用培養(yǎng)液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。
4．分裝：分裝入無菌安剖中，每安剖加1.5毫升細胞懸液。
5．封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可；如用火焰封閉安剖口后，仔細檢查，定要封嚴，必要時可浸入藍色液中觀察，為安全起見，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入后，融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人；紗袋一端系以線繩，末端扎有小牌，注明：細胞名稱，凍存日期，以便日后查找。
細胞復(fù)蘇的方法
1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。
2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。
3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養(yǎng)液，吹打使細胞懸浮。
4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。
5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。
污染的預(yù)防和清除
一、污染的預(yù)防
預(yù)防是防止細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：
（一）從操作者做起
1、操作者責(zé)任心要強，要細心穩(wěn)重，操作技術(shù)要熟練。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(guī)定穿*。進入后關(guān)好門，坐下來盡量少走動。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大批污染。
2、操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動燒灼。操作時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。
3、操作時要常更換吸管，切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實驗完畢及時收拾，保持實驗室清潔整齊，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。
（二）從物品、用品消毒滅菌著手細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
（三）防止細胞交叉污染
在進行多種細胞培養(yǎng)操作時，所用器具要嚴格區(qū)分，做上標記便于辨別。并按順序進行操作，避免一起進行時易發(fā)生混亂。在進行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細胞。所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇，重新培養(yǎng)。
二、污染的清除
培養(yǎng)細胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細胞價值不大，宜棄之；有細胞株留存的或可購置的，可在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細胞，再培養(yǎng)。若污染細胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。
（一）使用抗生素
抗生素對殺滅細菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素（*100u/mL加*100μg/mL），污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除*、*外，還可用*、*、多粘菌素、四環(huán)素、*等。常用400～800μg/mL*或200μg/mL四環(huán)素處理，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進行治療。近年來有報道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體有效。這三種抗生素均用PBS配成250X濃縮液，-20℃保存?zhèn)溆茫褂脻舛菴ip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。使用時先吸除污染的培養(yǎng)液，加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液，3天后再吸除培養(yǎng)液，加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)4天，如此連續(xù)3個輪次，直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后，再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次。
（二）使用支原體特異性血清
用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個月后仍為陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟。
（三）加溫處理
將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時，可殺死支原體，但對細胞有不良影響。所以在處理前要進行預(yù)試驗，摸索能zui大限度殺死支原體又對細胞影響zui小的加熱時間。此法有時不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。
（四）其他方法
除了上述去除污染的方法外，還有動物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴*再用光照射的方法及過濾法等，但均較麻煩，且效果不確定。所以一旦支原體污染，除非有特別重要價值，一般均棄之重新培養(yǎng)。
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